张冲 , 蔡铁城 , 陈华 , 曾建斌 , 庄伟建

1 福建农林大学生命科学学院, 福州, 350002;
2 福建省作物分子与细胞生物学重点实验室, 福州, 350002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 22 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000624
收稿日期: 2013年06月24日    接受日期: 2013年08月12日    发表日期: 2013年08月16日

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以优质高抗青枯病烤烟品种K326为材料，在苗期利用注射法接种烟草青枯菌，分不同时期取叶片，利用CTAB法提取接种和非接种的混合RNA，采用SMART (switching mechanism at 5' end of RNA tra- nscript)技术合成双链cDNA，经SfiⅠ酶切后胶回收纯化双链cDNA，连接到质粒载体pDNR-LIB上，电击转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，成功构建了青枯菌诱导的烟草叶片全长cDNA文库。经鉴定，初级文库库容为1.902×10⁶ cfu/mL，重组率达到98%以上，插入片段集中在0.75~2.0 kb之间，平均长度约为1 300 bp，经扩增后的文库滴度为2.97×10⁹ cfu/mL。随机挑取部分克隆测序，利用生物信息学软件进行初步分析获得部分EST数据。结果显示得到了高质量的全长cDNA文库，这为筛选和克隆青枯菌诱导的胁迫相关基因提供了资源基础。

烟草；青枯病；SMART技术；cDNA文库